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多肽的分离制备,如何上量？如何增大分离度?

反相HPLC应当是很好的分离小肽方法，用CH3CN或CH3OH：H2O（95：5）做流动相，看保留如何，若无保留，建议改用其他色谱方法进行分离。

关于多肽的分离，首先要知道它的分子量大小，然后选择不同类型的填料，如孔径的大小。我们先在分析柱（4.6mm内径）上做一下实验,找到很大的分离度,这一过程的难度是很大的,要不断地改变流动相和固定相,然后再线性或非线性放大到制备,放大的倍数按分析柱的实验结果。分离后可以通过冷冻干燥得到固体。

还可以考虑离子交换来分l离。

制备色谱之DAC如何次次装出高柱效

动态轴向压缩柱（Dynamic Axial Compression Column，DAC）是工业化制备液相色谱分离的重要组成部分。当用户填装直径50mm以上制备柱时，传统预装柱很难装出高柱效和对称性，另外预装柱使用过程柱头容易塌陷，导致柱效变差，无法满足长期持续纯化生产。DAC在运行过程中，活塞可以提供持续压力，保证很优的填装柱床密度和稳定性，从而长时间保持很佳分离效果。相比于预装柱或弹簧柱，DAC可以轻松填装和拆卸，实现不同填料反复填装和轻松切换。有人说大柱子不用考虑柱效和对称性，只要能分出样品就行。现实是色谱就是靠柱效来分离的，柱效越高，分离越好，载量越大，收率和得率越高。

通常制备色谱方法开发在4.6mm，10mm或20mm的半制备柱，然后放大到DAC50或DAC100, DAC200，DAC300, DA***50, DAC600或DAC800。理论上多大规模的色谱柱都可以实现与分析柱或半制备柱同样的效率，在现实中，设计优良的DAC柱效甚至高于预装柱。只有柱效和对称性类似才能保证了分离方法的线性放大。

色谱材料的不同

色谱材料的可选择性十分的广泛，因为需求的不同，标准化的色谱填料产品往往达不到所需的要求，因此根据需求进行定制化产品成为了一种常见的选择

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分析物的性质

在HPLC上分析的样品通常不耐热，并且在较高温度下会降解，而在GC中，溶质可承受高达400℃的温度，并且具有挥发性。用于HPLC分析的样品通常是液体或溶解在液体中的固体。除液体和溶解的固体外，GC还可以处***体。GC样品的分子量较低，而HPLC可用于分析涵盖从高分子量聚合物到大型生物分子的一系列样品的高分子量化合物。