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反相色谱分离纯化后，怎样除去流动相产品中的TFA和***或其他杂质？

TFA是反相色谱分离中常用的添加剂。可以用冻干的办法去除，国外许多文献是这样报道的。还可以试试离子交换、凝胶层析、甚至透析和超滤，其中，离子交换层析效果比较好，还可以起到浓缩样品的作用。

首先，冻干的办法应该可以几乎完全地除去TFA和***，***实验前尽量先检测一下冻干品中的残留量，只要不超过允许范围，这种办法是很简单、有效的。

其次，如果你的***的分装量不大的话(<100ug)，建议你用离子交换层析，尽量装一个小一点儿的柱子，让含盐洗脱峰的蛋白浓度达10mg/mL以上，稀释后完全符合试验要求。如果用分子筛，考虑稀释，尽量也先过一个离子交换。此外可以试试疏水层析。如果产品是碱的话，可能会形成TFA盐，这样通过上述方法就无法除去。一般可以用碱水洗，然后将产品萃取出来。或者在里面加入一定量的盐酸，再干燥后形成盐酸盐。

制备色谱

制备色谱是以分离出纯物质为目的的色谱系统，分析色谱是以分析出样品组分信息为目的的色谱系统，基于他们目的的不同，制备色谱相对于分析色谱有很多不同特征，不能简单等同。

当我们在实验室中想得到纳克乃至毫克级的纯物质时，稍微改装下分析型色谱系统就能简单轻松的完成，不过，若所需制备的纯品量很大，此时，再用分析型色谱系统分离纯化，可以预见这将是一场“灾难”。

制备色谱常用的色谱模式有低压，中压，高压三种，以应对不同类型和不同纯度要求的样品的分离，同时尽可能减少成本。

工业制备色谱

蛋白质的特定构象对蛋白质的生物功能起决定性的作用。而几乎所有的蛋白质必须与其他分子相结合才能发挥其功能和作用。当蛋白质的构象发生变化，例如通过加热或化学***处理等使多肽链的盘绕和折叠被解开，其空间结构发生变化， 则蛋白 质变性， 其功能和生物活性即丧失，作为现代生物科技的主要产品类型，蛋白质是结构和功能非常复杂的大分子。

氧化铝基质的基本特点

氧化铝基质的一大特点是结构稳定，既可呈酸性，又可呈碱性。其次，铝元素在自然界含量丰富，仅次于氧元素和硅元素。在实际应用中，色谱用氧化铝填料主要应用于正相色谱、反相色谱和离子交换色谱。对于一些不饱和化合物，特别是芳香族化合物的保留效果较佳，有时还可用于分离芳烃类异构体。除此之外，氧化铝基质的pH耐受范围在3-12，可用于分离碱性化合物。以上这些特点使得氧化铝在某些领域能与硅胶形成良好的互补作用。