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发布时间:2022-03-17 15:39:14
工业制备色谱
蛋白质的特点使得其分离过程与传统化工分离过程有着极为不同的特点:(1)分离对象是具有特定的生物活性的生物大分子产品,分离过程设计中不恰当的物理和化学环境等(如温度、PH值、缓冲液选择、、搅拌和剪切力等)皆有可能引起其蛋白质分子结构发生改变,从而使之失活;(2)由于发酵液、细胞培养液或匀浆液中,我们所需要的目标产物往往存在于含有许多性质十分相似的杂质的稀溶液中,如何从这样一种复杂的稀溶液中经济有效地提取产物是生物分离技术面临的重大课题;(3)从卫生和安全角度出发,对于用***工程产品,有着极高的纯度和同一性要求,对其中的***杂质去除率要求极高,对分离设备材质和分离过程中引入的分离介质也有着严格的限制。
产品纯度:目标产物有效成分的含量
纯度要求由其纯化目的来决定。一般情况下,微量的天然产物只需富集到70%就可进行初步鉴定;而在多步反应中,有些中间产物的纯度在80%左右即可满足要求;供核磁及红外测试的样品纯度需达到95%;而做定性和定量分析的标准样品含量则要求至少在99%以上。纯度是制备纯化工艺中关键标准,通常制备纯化工艺中的分离与收集过程决定终样品的纯度。
制备纯化效率:对整个色谱制备纯化工艺的评价,尤其是成本方面的考量。
纯度、收率都是有定量的数值决定,而制备纯化效率则是个复杂的评价过程,这个过程主要是对成本(物料成本、时间成本、人力成本)、安全性、一致性等多个方面考量。分离纯化工艺中的进样量、纯化时间、纯化重现性(一致性)、安全性等等都是实际生产过程中各企业需要考虑到的方面,尤其是成规模的企业对制备效率(成本、一致性、安全性)的控制极为看重。
流动相
HPLC中使用的流动相是液体,而在气相色谱法中则是气体。由于液体的密度和粘度较高,因此要使用泵来给流动相推动压力通过HPLC色谱柱,因此液相色谱的背压通常很高,比如超高压液相色谱。背压太高会对液相系统造成负担,因此适当的控制在合适的压力程度,有助于我们分析测试的正常运行。恒谱生的液相色谱柱、保护柱、在线过滤器等都能做到低背压,死体积小,避免对分析结果造成影响。
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