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液相色谱的分离过程

同其他色谱过程一样，HPLC也是溶质在固定相和流动相之间进行的一种连续多次交换过程。它借溶质在两相间分配系数、亲和力、吸附力或分子大小不同而引起的排阻作用的差别使不同溶质得以分离。

开始样品加在柱头上，假设样品中含有3个组分，A、B和C，随流动相一起进入色谱柱，开始在固定相和流动相之间进行分配。分配系数小的组分A不易被固定相阻留，较早地流出色谱柱。分配系数大的组分C在固定相上滞留时间长，较晚流出色谱柱。组分B的分配系数介于A，C之间，第二个流出色谱柱。若一个含有多个组分的混合物进入系统，则混合物中各组分按其在两相间分配系数的不同先后流出色谱柱，达到分离之目的。

不同组分在色谱过程中的分离情况，首先取决于各组分在两相间的分配系数、吸附能力、亲和力等是否有差异，这是热力学平衡问题，也是分离的首要条件。

其次，当不同组分在色谱柱中运动时，谱带随柱长展宽，分离情况与两相之间的扩散系数、固定相粒度的大小、柱的填充情况以及流动相的流速等有关。所以分离效果则是热力学与动力学两方面的综合效益。

液相色谱仪应用范围

它的应用范围比较大，而且有不断拓展的趋势。制备纯化样品是它的基础功能，通过色谱分离，样品中目标物质被分离出来有待进一步研究，比如分离水样中有机物、食品中以备分析等。然后是天然成分研究，有助于中药学的发展。分析前人留下的珍贵药典，通过药性研究造福人类。提高产品质量，以提高它的价值和效用，比如纯化***、纯化蛋白质制品等。还有一个方向是用于产品合成的研究，通过获得一些纯度较高的化合物将以促进合成实验的进行。

液相色谱仪

20世纪初在俄国的波兰植***学家茨维特（Twseet）首先将植物提取物放入装有碳酸钙的玻璃管中，植物提取液由于在碳酸钙中的流速不同分布不同，因此在玻璃管中呈现出不同的颜色，这样就可以对各种不同的植物提取液进行有效的成分分离。

1941年，马丁与辛格用一根装满硅胶微粒的色谱柱，完成了乙酰化氨基的分离，开启了液色谱技术，因此获得诺贝尔化学奖。1949年，马丁建立了色谱保留值与热力学常数之间的关系，奠定了***色谱的基础；1952年，马丁与辛格又创立了气液色谱法，分离了脂肪酸与脂肪胺。1966年之前科学家所做的努力，为传统经典液相色谱奠定了基础。

而液相色谱仪的鼻祖则是由斯坦因与莫尔于1958年设计的氨基酸分析仪，这种仪器能够分蛋白质水解的产物。首台商用LC则是由沃特斯公司制造。

1971年之后，液相色谱技术得到了飞速的发展，HPLC的分析体制也逐步完善。到了二十世纪八十年代中期，液相色谱技术已经非常非常成熟，激动人心的新发展日趋减少，人们开始转向相关领域发展，如超临界色谱、毛管电泳色谱、制备色谱等。