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发布时间:2022-06-27 14:48:35
反相色谱分离纯化后,怎样除去流动相产品中的TFA和***或其他杂质?
TFA是反相色谱分离中常用的添加剂。可以用冻干的办法去除,国外许多文献是这样报道的。还可以试试离子交换、凝胶层析、甚至透析和超滤,其中,离子交换层析效果比较好,还可以起到浓缩样品的作用。
首先,冻干的办法应该可以几乎完全地除去TFA和***,***实验前尽量先检测一下冻干品中的残留量,只要不超过允许范围,这种办法是很简单、有效的。
其次,如果你的***的分装量不大的话(<100ug),建议你用离子交换层析,尽量装一个小一点儿的柱子,让含盐洗脱峰的蛋白浓度达10mg/mL以上,稀释后完全符合试验要求。如果用分子筛,考虑稀释,尽量也先过一个离子交换。此外可以试试疏水层析。如果产品是碱的话,可能会形成TFA盐,这样通过上述方法就无法除去。一般可以用碱水洗,然后将产品萃取出来。或者在里面加入一定量的盐酸,再干燥后形成盐酸盐。
工业制备色谱
以重组DNA技术为标志的现代生物技术是当代高科技的之一,其发展将改变***农业、食品、能源、化学、环境等科学领域的传统面貌,促进人类社会生产力和科学技术的巨大进步,通常,生物技术产品的分离、纯化、直至得到符合需求的产品需要通过许多步骤才能实现。其中,吸附和液相色谱常常是其主要的、有时甚至是关键的分离技术之一。
流速的分类
色谱中的流速通常有两种表述方式,一种是体积流速,即单位时间内流过某截面的流体的体积,单位mL/min,实际的分离过程中多用此来表示流体的速度;另一种就是线流速,即流体中任一质点在单位时间内沿管路方向所通过的距离,单位cm/min,该表示方式多用于理论分析。通常,在分离纯化过程中应采用佳流速以期得到好的分离效果。佳线流速从根本上是由填料粒径和形状所决定,而佳体积流速可由佳线流速与柱子内径的截面积相乘而得到。二者之间可通过色谱柱的内径互相换算。
色谱柱大小
与气体相比,液体的密度和粘度更高,因此HPLC色谱柱通常较短且较宽。典型尺寸为10或25厘米,φ为0.46。
但是更大的色谱柱也已用于制备规模的应用,比如φ10、20、30的液相制备色谱柱。
恒谱生有各种直径大小的分析、制备液相色谱柱可供选择,柱管由316L不锈钢制成,不锈钢柱内壁多经过抛光,减小管壁效应,提高柱效的同时还能做到平衡时间短,高流速,低背压,缩短分析时间,节约溶剂,降低成本。
另一方面,由于气体密度较小且粘度较低,因此GC中建议使用更长的内径较窄的色谱柱。毛细管柱的长度可以达到几米。
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